当地时间11月06日至10日，2024年度的第39届癌症免疫治疗学会（SITC）年会在美国休斯敦举行。沙砾生物参加此次大会，分享由天泽云泰AaCas12b^Max技术平台支持制备下一代基因编辑型TIL的研究成果。近岸蛋白为本研究提供AaCas12b^Max的样品。

TIL（肿瘤浸润淋巴细胞）在黑色素瘤等多种实体瘤中显示出良好的治疗效果，并显著延长了晚期患者的生存期。然而对于一些淋巴细胞浸润较差的“冷肿瘤”来说，TIL的疗效仍有待评估和改善。开发下一代基因编辑型TIL疗法，将会是提高TIL功能的理想策略。

Cas12b是CRISPR家族中的一种效应核酸酶，在保持高效编辑效率的同时，在编辑精度上超过了目前常用的SpCas9核酸酶，可以用于有效地降低脱靶毒性，成为基因编辑应用的理想选择。在本项研究中，沙砾生物应用天泽云泰AaCas12b^Max技术，开发具有双基因敲除的下一代肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）产品——GT300。

本项目在设计AaCas12b^Max的sgRNA的过程时，利用了计算机辅助预测技术，降低全基因错配的风险。后续在HEK293细胞和人PBMC T细胞中，筛选了更为优选的sgRNA，用于进一步评估其在TIL产品中的编辑效率和编辑效果。

结果显示，筛选后的sgRNA用于AaCas12b^Max系统对TIL细胞进行基因敲除，具有和传统SpCas9系统类似的敲除效率。在小鼠PDX模型中，还进一步验证了AaCas12b^Max基因敲除后TIL，与传统SpCas9系统相当，具有良好的细胞杀伤能力、体外细胞因子释放能力和肿瘤抑制效果。

值得注意的是，由AaCas12b^Max编辑后的TIL产品，细胞扩增能力和细胞存活能力得到显著的提高，TIL扩增后产生的总细胞数增加了3-5倍。更进一步地，这些AaCas12b^Max编辑后的TIL产品表现出更高的细胞干性、更低的耗竭特征和凋亡率、以及在体内回输后更强的扩增能力（Fig 1）。

这表明，相对于传统SpCas9系统基因编辑会对TIL产品造成应激损伤，AaCas12b^Max编辑损伤更小、编辑的后TIL产品能够具有更好的细胞状态。

RNA-seq组学研究进一步发现，AaCas12b^Max编辑后T细胞产品的DNA修复速度更快，同时细胞凋亡低于SpCas9（Fig 2）；以及在细胞焦亡和耗竭通路异常激活等细胞状态受损方面，AaCas12b^Max也相对于SpCas9编辑有所改善。

同时，SITE-seq和GUIDE-seq分析发现，AaCas12b^Max编辑后的TIL产品中的脱靶位点明显减少，脱靶效应明显降低（Fig 3）。另外通过PEM-seq进行染色体易位分析，也发现AaCas12b^Max引起的染色体易位事件更少。

本次AaCas12b^Max技术用于TIL编辑的结果表明，AaCas12b^Max编辑能够在 TIL产品中实现高编辑效率和最小的脱靶效应，并且能够显著提高TIL产品的扩增能力、细胞活率、以及体内回输后的体内适应性。

特别感谢近岸蛋白进行AaCas12b^Max工艺开发和优化，并为本研究提供酶的样品。

沙砾生物应用天泽云泰AaCas12b^Max技术，开发了具有双基因敲除的下一代TIL产品——GT300。目前，该产品的临床研究也正在进行，接受各类晚期不可切除或转移性实体瘤受试者评估入组；相关受试者招募、入组和临床研究工作，正持续在多家临床中心开展。