人骨碱性磷酸酶(BALP)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名：人骨碱性磷酸酶(BALP)酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒用于测定人血液中骨碱性磷酸酶(BALP)含量。
实验原理
本试剂盒应用间接法测定标本中人骨碱性磷酸酶(BALP)水平。用纯化的人骨碱性磷酸酶(BALP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的骨碱性磷酸酶(BALP)标准品和未知浓度的骨碱性磷酸酶(BALP)待检样品，温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的骨碱性磷酸酶(BALP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人骨碱性磷酸酶(BALP)浓度。
试剂盒组成
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1 |
20倍浓缩洗涤液 |
50ml×1瓶 |
8 |
标准品S1（16μg/L） |
0.5ml×1瓶 |
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2 |
链霉亲和素-HRP |
6ml×1瓶 |
标准品S2（8μg/L） |
0.5ml×1瓶 | |
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3 |
酶标包被板 |
12孔×8条 |
标准品S3（4μg/L） |
0.5ml×1瓶 | |
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4 |
生物素标记的抗-IgG抗体 |
6ml×1瓶 |
标准品S4（2μg/L） |
0.5ml×1瓶 | |
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5 |
显色剂A液 |
6ml×1瓶 |
标准品S5（1μg/L） |
0.5ml×1瓶 | |
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6 |
显色剂B液 |
6ml×1/瓶 |
9 |
说明书 |
1份 |
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7 |
终止液 |
6ml×1瓶 |
10 |
封板膜 |
2张 |
标本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于
操作步骤
1. 根, 据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl，在样本反应孔中加入50微升样本，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，
3. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。
5. 加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。
6. 洗涤：操作同4。
7. 加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，
8. 洗涤：操作同4。
9. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或