植物组织直接PCR试剂盒Plant Tissue Direct PCR Kit(With Dye)
产品名称： 植物组织直接PCR试剂盒Plant Tissue Direct PCR Kit(With Dye)
英文名称： Plant Tissue Direct PCR Kit (With Dye)
产品编号： 10187ES50
产品价格： 393.00
产品产地： 翌圣生物
品牌商标： Yeasen
更新时间： 2024-12-10T11:21:51
使用范围： null
| 规格 | 价格 |
| 50T | 393.0 |
| 200T | 1353.0 |
- 联系人 : 李自转
- 地址 : 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
- 邮编 : 200030
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 139****5640 点击查看
- 传真 : 点击查看
- 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com
- 二维码 : 点击查看
产品描述
植物组织直接PCR试剂盒是一款可直接对不同类型植物叶片进行PCR扩增的试剂盒，适应性广、稳定性强。试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系，可以快速的裂解多种植物样品并释放出基因组DNA，不需要除去蛋白、RNA或次生代谢产物等，即可将释放出的基因组DNA作为模板直接用于PCR反应。此外，样品使用量少，低至1 mm植物叶片即可进行实验。
本试剂盒中提供的2× Plant Master Mix具有很强的扩增兼容性，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率。
该试剂盒可用于转基因植株鉴定、植物基因分型等。
产品组分
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类别 |
编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
储存 |
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10187ES50（50 T） |
10187ES70（200 T） |
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Part I |
10187-A |
Buffer P1 |
1.25 mL × 2 |
5 mL × 2 |
4℃ |
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10187-B |
Buffer P2 |
500 μL |
1 mL × 2 |
4℃ |
|
|
Part II |
10187-C |
2× Plant Master Mixa |
500 μL |
1 mL × 2 |
-20℃ |
a）2× Plant Master Mix：包含热启动Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等，同时包含电泳Loading Buffer, PCR完成之后可直接电泳。
运输方法
冰袋运输。
保存方法
1. 试剂10187-A【Buffer P1】，置于4℃保存。有效期1年。
2. 试剂10187-B【Buffer P2】，中和裂解产物，利于更长时间保存样本，置于4℃保存。有效期1年。
3. 试剂10187-C【2 × Plant Master Mix】，-20℃保存，避免反复冻融。有效期1年。
操作方法
植物叶片
研磨裂解法：
①研磨仪破碎：将直径5 mm左右的叶片置于50 μL Buffer P1中，用研磨仪加钢珠（钢珠直径3mm左右，共2个）破碎叶片（45 Hz，1 min），叶片破碎后溶液呈现绿色，瞬时离心，上清液请放在4℃备用，取1 μL用于PCR扩增。
②枪头捣碎：推荐使用幼嫩叶片。将直径5 mm左右的叶片置于50 μL Buffer P1中，用枪头将叶片捣碎，捣碎后溶液呈现绿色，瞬时离心，上清液请放在4℃备用，取1 μL用于PCR扩增。
加热裂解法：推荐使用幼嫩叶片。将直径5 mm左右的叶片置于50 μL Buffer P1中，95℃加热5-10 min（确保裂解液完全浸没叶片），较难裂解的叶片（老叶片）可适当延长时间（10-20 min），加热裂解后溶液呈现绿色，震荡混匀，瞬时离心，上清液请放在4℃备用，取1 μL用于PCR扩增。
直接法：推荐使用幼嫩叶片。使用打孔器或者刀，将直径1 mm左右的叶片直接加入到PCR反应体系中；复杂样本或者是长片段的扩增，推荐使用直径<1 mm的叶片。
PCR反应体系
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组分 |
体积（μL） |
体积（μL） |
终浓度 |
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2× Plant Master Mix |
10 |
25 |
1× |
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Forward Primer (10 μM) |
0.5 |
1 |
0.2-0.25 μM |
|
Reverse Primer (10 μM) |
0.5 |
1 |
0.2-0.25 μM |
|
裂解产物（DNA模板） |
1 |
2 |
- |
|
ddH2O |
To 20 |
To 50 |
- |
【注】：各组分使用前应充分混匀。
a）模板加入量：小于PCR反应体系的5%，过多会严重抑制PCR反应，强烈推荐加入1 μL模板。叶片直扩优先推荐研磨仪裂解法。
b）引物终浓度：0.2-0.25 μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。
c）反应体系：推荐使用20 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。
e）对照反应：建议进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。
f）为了更稳定的保存裂解后的模板，将转移出来的上清液，按照裂解产物（DNA模板）：Buffer P2 = 5:1的比例混合，混匀后-20℃保存，稳定保存随时间和样本状态不同而有所不同。如果处理后的植物叶片上清液一周内用于PCR扩增，不用加Buffer P2，上清液请保存在-20℃。
PCR反应条件
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
94℃ |
5 min |
1 |
|
变性 |
94℃ |
10 sec |
35 |
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退火 |
50-65℃ |
20 sec |
|
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延伸 |
72℃ |
1 min |
|
|
终延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
【注】：a）退火温度：请参考引物的理论 Tm 值，退火温度可设置低于引物理论值 2-5℃。
b）延伸时间：需要根据片段的长度来确定，对于1 kb以内的DNA片段，建议延长时间为1 min。
注意事项
1. 做叶片实验时，建议使用新鲜采取的叶片组织，若为长期冷冻组织，需-80℃保存，应尽量避免反复冻融，以免造成模板降解，影响PCR效率。叶片组织以幼嫩为宜，若为成熟的叶片，避免使用叶片主脉部位组织。
2. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率最佳。
3. 取样时使用打孔器或者刀取适宜大小的样本，样本不同时，打孔器或者刀每次处理样本前需清洗干净。
4. 对于叶片组织，建议取1-10 mm的叶片，过小会使PCR扩增产量低，过多会抑制PCR反应，采用加热裂解法、枪头捣
碎、研磨仪破碎的方式处理植物叶片，处理后需震荡离心，务必取上清液试验，沉淀会严重抑制PCR反应。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
6. 本产品仅作科研用途！
常见问题与解决方法
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常见问题 |
可能原因 |
解决方法 |
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阳性对照、待测样本均无条带。 |
PCR反应体系或反应条件不合适。 |
使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。 |
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PCR试剂保存不当失去活性。 |
2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。 |
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引物设计问题。 |
尝试重新设计引物进行检查。 |
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阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。 |
裂解液、中和液加入比例不当，裂解混合液影响PCR体系的pH值。 |
正常条件下，中和后的裂解混合液的 pH 应该在7-8左右(裂解产物和Buffer P2严格按照5:1的量进行中和)。 |
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样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。 |
裂解混合液液可在4℃保存5天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 |
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模板加入量不适合。 |
在反应体系<5%范围内优化模板加入量。 |
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PCR循环数不足。 |
适当增加PCR的循环数，推荐35-40循环为佳。因模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。 |
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非特异性扩增 |
PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。 |
增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
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PCR引物错配。 |
重新设计PCR引物。 |
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配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 |
PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 |
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阴性对照出现目的条带 |
操作工具或试剂污染。 |
实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
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样本间交叉污染。 |
每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。 |
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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10184ES50/70 |
50/200 T |
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10185ES50/70 |
50/200 T |
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10170ES50/70 |
50/200 T |
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19698ES50/70 |
50/200 T |
HB210708