TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC)

TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（FITC）

产品信息

产品描述

细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200 bp的DNA ladder。 

TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)细胞凋亡检测试剂盒（FITC）可以用来检测组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是在末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因组DNA断裂时暴露出的3´-羟基（3´-OH）末端掺入FITC-12-dUTP，从而可以用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

本试剂盒对标记反应进行了优化，采用最佳比例的FITC-12-dUTP和未标记dNTP进行3’-OH末端的核苷酸掺入，使得同一个断裂的DNA片段末端可以形成更长的“标记尾巴”。该“标记尾巴”减少了相邻掺入dNTP上标记基团的空间位阻，增加每个断裂片段上的荧光基团数目，降低荧光基团相邻后可能造成的聚集和淬灭，从而提高检测灵敏度，减少非特异性反应。

本试剂盒应用范围广，可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。

产品组分

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。

本试剂盒储存在-20℃，FITC-12-dUTP Labling Mix避光储存于-20℃，保质期为二年。

注意事项

1）需自备用于洗涤细胞的PBS，用于封片的抗荧光淬灭封片液，用于固定的4%多聚甲醛。

2）如需染核，需自备DAPI（2 μg/mL）或PI（1 μg/mL）。

3）如果用流式细胞仪，自备PI（1 μg/mL）和DNase Free RNase A。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5）本产品仅作科研用途！

操作步骤

一、样品准备

A. 石蜡包埋组织切片

1. 室温下将石蜡组织切片放入二甲苯中浸泡5 min，重复一次，以彻底脱掉石蜡。

2. 室温下用100%乙醇浸泡切片5 min，重复一次。

3. 室温下用梯度乙醇（90、80、70%）各浸洗1次，每次3 min。

4. 用PBS轻轻润洗切片，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持样本的湿润。

5. 配制Proteinase K工作液：按1:100的比例，用PBS作为稀释液来稀释2 mg/mL的Proteinase K溶液，使其终浓度为20 μg/mL。

6. 每个样本上滴加100 μL上述Proteinase K工作液，使其被全部覆盖，室温孵育20 min。

注：Proteinase K帮助组织和细胞对后续步骤的染色试剂通透。孵育时间过长会增加组织切片在后续洗涤步骤中从载波片上脱落的风险，过短则可能造成透性处理不充分，影响标记效率。未得到更好的结果，可能需要优化Proteinase K孵育的时间。

7. 用PBS溶液润洗样本，轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干载玻片上样本周围的液体。处理后的样本放在湿盒中保存样本的湿润。

B. 组织冰冻切片

1. 将玻片浸没在4%多聚甲醛溶液（溶于PBS）中固定，室温下孵育15 min。

2. 轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。

3. 将玻片浸没在PBS溶液中，室温孵育15 min。

4. 轻轻去掉多余液体，并用滤纸小心吸干玻片上样本周围多余的液体。这时，可用石蜡笔或疏水笔在样品周围描绘样品分布的轮廓，便于下游透性处理和平衡标记操作。在实验过程中，切勿让样品干燥，处理好的样本放在湿盒中保持样本的湿润。

5. 配制Proteinase K工作液：按1:100的比例，用PBS作为稀释液来稀释2 mg/mL的Proteinase K溶液，使其终浓度为20 μg/mL。

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