XL10-Gold Chemically Competent Cell 
XL10-Gold化学感受态细胞
产品信息

    

        

            

            
产品名称
            
            

            
产品编号
            
            

            
规格
            
            

            
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价格（元）
            
        
        

            

            
XL10-Gold Chemically Competent Cell XL10-Gold化学感受态细胞
            
            

            
11810ES80  
            
            

            
100 μl×10管
            
            

            
-80℃
            
            

            
287
            
        
    

产品描述
XL10-Gold化学感受态细胞是经特殊工艺处理得到的感受态细胞，特别适合于大分子量DNA的高效转化。具有四环素和氯霉素抗性，使用Puc19质粒测得其转化效率达108cfu/μg，主要具有如下特点：
①Hte表型可增强较大分子量质粒和连接产物的高效转化；
②具有限制性内切酶缺陷性，更利于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取；
③更适于质粒文库的构建；
④具有lacIqZΔM15，可用于蓝、白斑筛选。
本品基因型：
TetrΔ(mcrA)183Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lacHte [F′proABlacIqZΔM15 Tn10 (Tetr) Amy Camr]。
产品组分

    

        

            

            
编号
            
            

            
组分
            
            

            
规格
            
            

            
保存温度
            
        
        

            

            
11810-A
            
            

            
XL10-Gold化学感受态细胞
            
            

            
100 μl × 10
            
            

            
-80℃
            
        
        

            

            
11810-B
            
            

            
pUC19（10pg/μl）
            
            

            
10 μl× 1
            
            

            
-20℃
            
        
    

运输与保存方法
干冰运输。
XL10-Gold化学感受态细胞-80℃保存，pUC19质粒-20℃保存。有效期半年。不能保存于液氮！
注意事项
1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3）为确保最高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温，且每次转化感受态使用量，不低于100μl。
4）为防止转化不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，最低化实验可能遇到的风险。
使用方法
1）取100μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2）向100μl感受态细胞悬液中加入0.1-50ng（＜10μl/100μl感受态）目的DNA或2μl连接产物，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30min。
3）置于42℃水浴中热激30s，然后快速将管转移到冰浴中，冷却2-3min，该过程不要摇动离心管，否则会降低?化效率。
4）向离心管中加入900μl 42℃预热的无菌NZY+培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养1h（225-250rpm），目的是促使菌体复苏。
【注】：此步也可用LB培养基（不含抗生素）进行菌体复苏。
5）取上述≤200μl转化产物涂至含有相应抗生素的LB固体平板上，将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
【注】：如需做蓝白斑筛选，需至少孵育17h，以充分显色。




附录一：常用抗生素工作浓度


    

        

            

            
抗生素
            
            

            
翊圣货号
            
            

            
常用工作浓度
            
        
        

            

            
Ampicillin 氨苄青霉素
            
            

            
60203ES10
            
            

            
100 μg/ml
            
        
        

            

            
Carbenicillin羧苄青霉素
            
            

            
60202ES08
            
            

            
100 μg/ml
            
        
        

            

            
Chloramphenicol 氯霉素
            
            

            
60205ES10
            
            

            
33 μg/ml
            
        
        

            

            
Kanamycin 卡那霉素
            
            

            
60206ES10
            
            

            
30 μg/ml
            
        
        

            

            
Streptomycin 链霉亲和素
            
            

            
60211ES60
            
            

            
25 μg/ml
            
        
        

            

            
Tetracycline 四环素
            
            

            
60212ES25
            
            

            
15 μg/ml
            
        
    


 
附录二NZY+培养基配方
10 g of NZ amine (casein hydrolysate)
5 g of yeast extract
5 g of NaCl
Add deionized H2O to a final volume of 1 liter 
Adjust to pH 7.5 using NaOH and then autoclave
Add the following filer-sterilized supplements prior to use: 
12.5 ml of 1 M MgCl2
12.5 ml of 1 M MgSO4
20 ml of 20% (w/v) glucose (or 10 ml of 2 M glucose)