肌酸激酶测定试剂盒 UV板 微量法
产品名称: 肌酸激酶测定试剂盒 UV板 微量法
英文名称: Micro Creatine Kinase Assay Kit
产品编号: BC1145
产品价格: 0
产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三
品牌商标: Solarbio
更新时间: 2024-12-10T10:31:04
使用范围: null
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产品内容:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂1瓶,4℃避光保存,使用前加10mL蒸馏水溶解。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃保存。
工作液:临用前根据用量将试剂一和试剂二以1:1混合。使用前37℃温育2min。
产品说明:
CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中,能可逆地催化肌酸与ATP 之间的转磷 酰基反应,在能量运转、肌肉收缩和ATP 再生中有重要作用,是临床诊断心脑疾病的一个重要指标。 CK 催化磷酸肌酸和ADP 生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP 与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖, 6-磷 酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH,导致340nm 光吸收值增加。 自备实验用品及仪器: 天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取
1. 组织样本:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加 入1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心15min,取上清,置冰上待测。
2. 血清样本:直接测定。
二、测定操作表
1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至340nm。
2.操作表
| 空白管 | 测定管 |
酶液(μ L) |
| 60 |
工作液(μ L) | 150 | 150 |
H2O(μ L) | 150 | 90 |
混匀,于1mL 石英比色皿,对照管调零,测定340nm 的初始值A1,测定完立即放入37℃ 水浴,准确计时,分别测定1min,2min,3min 时的吸光值A2,计算时取平均值,△A= A2-A1。 |
注意:空白管只需测定一次。
三、CK 活性计算公式
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按组织蛋白含量计算
酶活定义:37℃,pH7.0时,每毫克蛋白质1min内催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。
CK活性(nmol/min/ mg prot)= △A/(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)= 804×△A÷Cpr
(2)按组织样本质量计算:
酶活定义:37℃,pH7.0时,每克样品1min内催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。
CK活性(nmol/min/g)= △A/(ε×d)×V反总÷(V样÷V样总×W)= 804×△A÷W
(3)按血清计算:
酶活定义:37℃,pH7.0时,每升血清1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性(nmol/min/L)= △A/(ε×d)×V反总÷V样×1000= 804000×△A ε:NADPH微摩尔消光系数,6220 L /mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应体系总体积, 0.3mL;V样:反应体系中样本体积,0.06mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
b.用96孔板计算公式如下
(1)按组织蛋白含量计算
酶活定义:37℃,pH7.0时,每毫克蛋白质1min内催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。
CK活性(nmol/min/ mg prot)= △A/(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)= 1608×△A÷Cpr
(2)按组织样本质量计算:
酶活定义:37℃,pH7.0时,每克样品1min内催化产生1nmolNADPH为一个酶活单位。
CK活性(nmol/min/g)= △A/(ε×d)×V反总÷(V样÷V样总×W)= 1608×△A÷W
(3)按血清计算:
酶活定义:37℃,pH7.0时,每升血清1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。
CK活性(nmol/min/L)= △A/(ε×d)×V反总÷V样×1000= 1608000×△A ε:NADPH微摩尔消光系数,6220 L /mol/cm;d:比色皿光径,0.5cm;V反总:反应体系总体积, 0.3mL;V样:反应体系中样本体积,0.06mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
注意事项:
1. 配制好的工作液4℃稳定7 天,请尽量配制后尽快使用。
2. 血清的CK 不稳定,采集样本后尽快测定,4℃避光保存可稳定24h。
3. 样品蛋白质含量需要另外测定,可选用BCA 蛋白含量测定试剂盒进行测定。 4. OD 值大于 0.5 可用提取液适当稀释样品,并在计算公式中相应的改变稀释倍数。