Tn5 Transposase (10 U/μL)
产品名称: Tn5 Transposase (10 U/μL)
英文名称: Tn5 Transposase (10 U/μL)
产品编号: 14524ES60
产品价格: 0
产品产地: Yeasen
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2024-12-10T13:18:22
使用范围: null
规格 | 价格 |
100 U | 3615.0 |
14524ES76 | 14460.0 |
- 联系人 : 李自转
- 地址 : 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
- 邮编 : 200030
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 139****5640 点击查看
- 传真 : 点击查看
- 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com
- 二维码 : 点击查看
产品简介
Tn5 Transposase是野生型Tn5转座酶的突变形式。Tn5转座酶是Tn5转座子的核心酶,具有高效的切割和插入活性。Tn5转座酶识别其转座子序列的内端(inside end, IE)、外端(outside end, OE)和嵌合端(mosaic end, ME)序列。利用其转座原理,能携带核酸打断并连接入底物核酸序列中,形成打断和插入机制,广泛应用于体外转基因以及转座酶法建库中。
产品信息
货号 |
14524ES60/14524ES76 |
规格 |
100 U/500 U |
组分信息
组分名称 |
14524ES60 |
14524ES76 |
Tn5 Transposase (10 U/μL) |
10 μL |
50 μL |
储存条件
-85~-65℃保存,有效期1年。
使用说明
以高通量测序建库为例,在使用前,请务必仔细阅读使用说明。
- 接头制备
1)Illumina平台参考引物名称及序列:
Primer A:5'-phos-CTGTCTCTTATACACATCT-NH2-3'
Primer B:5′-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3′
Primer C:5′-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3′
2)使用Annealing Buffer溶解Primer A、Primer B、Primer C至100 μM。
3)分别配制如下反应体系:
组分 |
反应1 |
Primer A(100 μM) |
10 μL |
Primer B(100 μM) |
10 μL |
total |
20 μL |
组分 |
反应2 |
Primer A(100 μM) |
10 μL |
Primer C(100 μM) |
10 μL |
total |
20 μL |
4)分别将反应1和反应2涡旋振荡充分混匀,并短暂离心使溶液回到管底。置于PCR仪内,进行如下反应程序:热盖105℃ On,94℃加热2 min。时间到后,停止反应程序,不要打开热盖,让PCR管在PCR仪器中自然冷却2 h,然后再于4℃中放置5 min。
5)反应结束后,将反应1和反应2等体积混合,混匀。命名为Adapter Mix,-25~-15℃保存。
2.转座子生成
1) 配置以下反应体系:
组分 |
体积(μL) |
Tn5 Transposase (10 U/μL) |
2 |
Adapter mix (25 μM)* |
1.6 |
Assemble Buffer |
Up to 20 |
*Adapter mix根据实验目的以及测序平台,自备。
2)反应条件:使用移液器轻轻吹打充分混匀。置于25℃反应1 h(热盖关闭)。反应产物命名为Tn5 Mix,可直接应用于建库实验,或-25~-15℃保存。
3. DNA片段化测试
1)配置以下反应体系:
组分 |
体积(μL) |
Input DNA (50 ng/μL) |
X* |
5×Tagment buffer |
4 |
Tn5 Mix |
1** |
ddH2O |
Up to 20 |
*DNA 使用量越大,片段化产物平均长度越长;反之,片段化产物平均长度越短。
**如需提高打断程度,可提高Tn5 Mix使用量;反之,可减少酶使用量。
2)片段化反应程序
轻轻吹打或振荡混匀,短暂离心。按照下表所示反应程序,进行片段化反应。
温度 |
时间 |
热盖105℃ |
On |
55°C |
10 min |
4°C |
Hold |
3)DNA片段化终止
配置以下反应体系,在上述片段化产物中添加下表中各反应组分,使用移液器轻轻吹打20次混匀。
组分 |
体积(μL) |
片段化产物 |
20 |
6×Terminate Solution |
4 |
Total |
24 |
按照下表所示反应程序,进行终止反应。
温度 |
时间 |
热盖105℃ |
On |
55°C |
10 min |
4°C |
Hold |
待样品温度降到4°C后,取出PCR管,进行片段化产物纯化,可以选择1.2×磁珠纯化,推荐使用Hieff NGS® DNA Selection Beads(Cat#12601ES),最终使用21 μL ddH2O洗脱片段化产物。请勿使用TE等含金属离子络合剂的缓冲液洗脱片段化产物!
4)片段化产物质量控制
a. 使用 Qubit 进行浓度测定。
b. 使用 Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer 进行长度分布检测。
5)片段化产物扩增
可根据具体的实验目的与测序平台选择合适的试剂进行扩增实验。
注意事项
1. 转座酶对温度敏感,建议尽快完成接头包埋,生成的转座子可于-25~-15℃保存,有效期1年。
2. 本产品仅作科研用途。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
4. 该产品不提供Buffer,如需转座酶加Buffer,可采购Cat#12900ES。
Ver.CN20230822