Tn5 Transposase (10 U/μL)-酶-试剂-生物在线
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Tn5 Transposase (10 U/μL)

Tn5 Transposase (10 U/μL)

商家询价

产品名称: Tn5 Transposase (10 U/μL)

英文名称: Tn5 Transposase (10 U/μL)

产品编号: 14524ES60

产品价格: 0

产品产地: Yeasen

品牌商标: Yeasen

更新时间: 2024-12-10T13:18:22

使用范围: null

规格 价格
100 U 3615.0
14524ES76 14460.0
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产品简介

 

Tn5 Transposase是野生型Tn5转座酶的突变形式。Tn5转座酶是Tn5转座子的核心酶,具有高效的切割和插入活性。Tn5转座酶识别其转座子序列的内端(inside end, IE)、外端(outside end, OE)和嵌合端(mosaic end, ME)序列。利用其转座原理,能携带核酸打断并连接入底物核酸序列中,形成打断和插入机制,广泛应用于体外转基因以及转座酶法建库中。

 

产品信息

 

货号

14524ES60/14524ES76

规格

100 U/500 U

 

组分信息

 

组分名称

14524ES60

14524ES76

Tn5 Transposase (10 U/μL)

10 μL

50 μL

 

储存条件

 

-85~-65℃保存,有效期1年。

 

使用说明

 

以高通量测序建库为例,在使用前,请务必仔细阅读使用说明。

  1. 接头制备

1)Illumina平台参考引物名称及序列:

 Primer A:5'-phos-CTGTCTCTTATACACATCT-NH2-3'

 Primer B:5′-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3′

 Primer C:5′-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3′

2)使用Annealing Buffer溶解Primer A、Primer B、Primer C至100 μM。

3)分别配制如下反应体系:

组分

反应1

Primer A(100 μM)

10 μL

Primer B(100 μM)

10 μL

total

20 μL

 

组分

反应2

Primer A(100 μM)

10 μL

Primer C(100 μM)

10 μL

total

20 μL

4)分别将反应1和反应2涡旋振荡充分混匀,并短暂离心使溶液回到管底。置于PCR仪内,进行如下反应程序:热盖105℃ On,94℃加热2 min。时间到后,停止反应程序,不要打开热盖,让PCR管在PCR仪器中自然冷却2 h,然后再于4℃中放置5 min。

5)反应结束后,将反应1和反应2等体积混合,混匀。命名为Adapter Mix,-25~-15℃保存。

2.转座子生成

1) 配置以下反应体系:

组分

体积(μL)

Tn5 Transposase (10 U/μL)

2

Adapter mix (25 μM)*

1.6

Assemble Buffer

Up to 20

*Adapter mix根据实验目的以及测序平台,自备。

2)反应条件:使用移液器轻轻吹打充分混匀。置于25℃反应1 h(热盖关闭)。反应产物命名为Tn5 Mix,可直接应用于建库实验,或-25~-15℃保存。

3. DNA片段化测试

1)配置以下反应体系:

组分

体积(μL)

Input DNA (50 ng/μL)

X*

5×Tagment buffer

4

Tn5 Mix

1**

ddH2O

Up to 20

*DNA 使用量越大,片段化产物平均长度越长;反之,片段化产物平均长度越短。

**如需提高打断程度,可提高Tn5 Mix使用量;反之,可减少酶使用量。

2)片段化反应程序

轻轻吹打或振荡混匀,短暂离心。按照下表所示反应程序,进行片段化反应。

温度

时间

热盖105℃

On

55°C

10 min

4°C

Hold

3)DNA片段化终止

配置以下反应体系,在上述片段化产物中添加下表中各反应组分,使用移液器轻轻吹打20次混匀。

组分

体积(μL)

片段化产物

20

6×Terminate Solution

4

Total

24

按照下表所示反应程序,进行终止反应。

温度

时间

热盖105℃

On

55°C

10 min

4°C

Hold

待样品温度降到4°C后,取出PCR管,进行片段化产物纯化,可以选择1.2×磁珠纯化,推荐使用Hieff NGS® DNA Selection Beads(Cat#12601ES),最终使用21 μL ddH2O洗脱片段化产物。请勿使用TE等含金属离子络合剂的缓冲液洗脱片段化产物!

4)片段化产物质量控制

a. 使用 Qubit 进行浓度测定。

b. 使用 Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer 进行长度分布检测。

5)片段化产物扩增

可根据具体的实验目的与测序平台选择合适的试剂进行扩增实验。

 

注意事项

 

1. 转座酶对温度敏感,建议尽快完成接头包埋,生成的转座子可于-25~-15℃保存,有效期1年。

2. 本产品仅作科研用途。

3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

4. 该产品不提供Buffer,如需转座酶加Buffer,可采购Cat#12900ES。

Ver.CN20230822