北京索莱宝科技有限公司--实验室产品
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X-α-gal α-半乳糖苷酶显色底物
品牌：Solarbio | 货号：B8050 | CAS：107021-38-5
别名 : 5-溴-4-氯-3-吲哚-a-D-半乳糖苷 英文名称 : X-a-gal CAS : 107021-38-5 分子式 : C14H15BrClNO6 分子量 : 408.63 储存条件 : -15°C避光避潮保存 纯度 : 95% 外观（性状） : 白色或灰白色结晶粉末，或者无色结晶 单位 : 瓶
B8050-10mg Solarbio 10mg 400.00元
B8050-100mg Solarbio 100mg 2400.00元
产品信息：
X-α-Gal是一种酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的显色底物，用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。通过蓝白颜色筛选，快速和简便地识别阳性的蓝色克隆，无需费时的β-半乳糖苷酶报告基因检测。
X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活，MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因，编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色产物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色，即阳性的双杂交作用。
设计适用于蓝白斑筛选的基因工程菌为β-半乳糖苷酶缺陷型菌株。这种宿主菌基因组中编码β-半乳糖苷酶的基因突变，造成其编码的β-半乳糖苷酶失去正常N段一个146个氨基酸的短肽（即α肽链），从而不具有生物活性，即无法作用于X-gal产生蓝色物质。用于蓝白斑筛选的载体具有一段称为lacz的基因，lacz中包括：一段β-半乳糖苷酶的启动子；编码α肽链的区段；一个多克隆位点(MCS)。MCS位于编码α肽链的区段中，是外源DNA的选择性插入位点。虽然上述缺陷株基因组无法单独编码有活性的β-半乳糖苷酶，但当菌体中含有带lacz的质粒后，质粒lacz基因编码的α肽链和菌株基因组表达的N端缺陷的β-半乳糖苷酶突变体互补，具有与完整β-半乳糖苷酶相同的作用X-gal生成蓝色物质的能力，这种现象即α-互补。
操作中，添加IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)以激活lacz中的β-半乳糖苷酶的启动子，在含有X-gal的固体平板培养基中菌落呈现蓝色。以上是携带空载体的菌株产生的表型。当外源DNA（即目的片段）与含lacz的载体连接时，会插入进MCS（即靶基因），使α肽链读码框破坏，这种重组质粒不再表达α肽链，将它导入宿主缺陷菌株则无α互补作用，不产生活性β-半乳糖苷酶，即不可分解培养基中的X-gal产生蓝色，培养表型即呈现白色菌落。
实验中，通常蓝白筛选是与抗性筛选一同使用的。含X-gal的平板培养基中同时含有一种或多种载体所携带抗性相对应的抗生素，这样，一次筛选可以判断出：未转化的菌不具有抗性，不生长；转化了空载体，即未重组质粒的菌，长成蓝色菌落；转化了重组质粒的菌，即目的重组菌，长成白色菌落。
x-α-gal a-半乳糖苷酶显色底物用途：
（1）α-半乳糖苷酶的显色底物，形成蓝色沉淀。在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用，利用此底物可以省去双杂交体系中的β-半乳糖苷酶溶液和filter-lift assays；
（2）用于区分肠杆菌科内的不同菌种以及区分双歧杆菌和乳酸菌；
（3）在组织化学中用于酶活性的检测；
x-α-gal a-半乳糖苷酶显色底物
储存液的配制及使用步骤：
A）涂布于预制平板：溶解24mg X-α-gal于6 mL DMF，终浓度为4mg/ mL的溶液。
①涂布200ul(15cm) 或者100ul（10cm）X-α-gal 储存液于预制平板上；
②放于37℃培养箱至液体被吸收（由于DMF挥发性低，最长可放4小时）；
③将转化细菌或酵母涂于平板上，于37℃或30℃培养直至蓝色菌落出现。
B）直接加入琼脂中：溶解60mg X-α-gal于3 mL DMF，终浓度为20mg/ mL的溶液。
①将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55 ℃；
②往已冷却的培养基中直接加入2 ml -10 ml 20 mg/ ml X-α-Gal储存液，混匀，快速倒平板。
外观：白色或灰白色结晶粉末，或者无色结晶；
溶解度（1%甲醇溶液）：无色，清澈；
储存：-15°C避光避潮保存；
x-α-gal α-半乳糖苷酶显色底物
北京索莱宝科技有限公司
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