大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)
产品名称: 大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)
英文名称: Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli
产品编号: 20401ES60
产品价格: 408.00
产品产地: 翌圣生物
品牌商标: Yeasen
更新时间: 2024-12-10T11:21:51
使用范围: null
规格 | 价格 |
100U | 408.0 |
200U | 618.0 |
500U | 1188.0 |
1000U | 2145.0 |
5000U | 6745.0 |
- 联系人 : 李自转
- 地址 : 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
- 邮编 : 200030
- 所在区域 : 上海
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- 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com
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产品描述
重组肠激酶(rEK)是高纯度的牛肠激酶轻链亚基,它有着和天然提取的肠激酶同样特异的切割酶活性,切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标签,本rEK具有比天然酶更高的切割活性。
本品为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶,适用范围广,并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品不含标签,由于具有极高酶切活性,酶切反应使用量少,不影响下游蛋白应用,故后续不需将其去除。
产品组分
编号 |
组分 |
产品编号/规格 |
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20401ES60 |
20401ES70 |
20401ES76 |
20401ES80 |
20401ES90 |
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20401 |
rEK重组肠激酶 |
100 U |
200 U |
500 U |
1000 U |
5000 U |
运输和保存方法
冰袋运输。试剂盒内各组分-20°C保存两年,尽量避免反复冻融(5次以内没问题)。
基本特性
来源(Source) |
E.Coli |
分子量(Molecular Weight) |
理论值25.850 kDa |
外观(Appearance) | 无菌液体 |
酶浓度(Enzyme Concentration) |
≥5 U/uL |
活性定义(Activity Definition) |
一个活性单位定义为25°C,12-16 h,在25 mM Tris-HCl,Ph 8.0缓冲体系下,将500 μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量 |
内毒素检测(Endotoxin) | 用LAL法测定内毒素含量小于1 EU/μg |
质量保证(Quality assurance) |
经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;本制品中不含有非特异性的蛋白酶切活性 |
常见影响肠激酶活性的因素(Influence factors) | >2 M尿素,>200 mM NaCl,>20 mM β-ME,>0.1%SDS,>50 mM咪唑,或>5%甘油 |
应用举例
【注】该酶效力高且待切蛋白结构性质不同,建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。
1)反应体系
融合蛋白 |
0.05-0.1 mg(蛋白浓度:0.1-1 mg/mL) |
Enterokinase |
0.1-0.2 U |
缓冲体系 |
25 mM Tris-HCL 8.0 |
注:缓冲液的使用体积等比例融合蛋白和酶使用量的总和。
2)反应条件:25°C过夜酶切(注:完全酶切需要16-24 h)。
【注】重组肠激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀释成每1 μL含0.1单位的溶液使用。
反应条件:4°C低温酶切条件,完全酶切需要48-64 h 或者增加2-3倍酶量。
注意事项
1)本产品所讲述的缓冲体系需要自行配置。
2)在>200mM咪唑,或>200mM NaCl,或>5%甘油,酶切会受到影响。如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种,为获得理想的酶切结果,请先将样品透析到25 mM Tris-HCl 8.0缓冲液中,然后再进行酶切实验;若不方便透析,可将样品稀释,使得各组分低于干扰浓度后再酶切,酶的用量与蛋白比例不变;若干扰因素很多,且不便去除,需要适当增加酶量或延长酶切时间,有助于得到理想的酶切效果。
3)磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用,痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性,因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
4)本品是具有高酶活力重组肠激酶,切割蛋白使用量少,可不考虑除去。
5)蛋白酶切效果不好,可适当增加酶量,或适当延长酶切时间。
6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
HB220829