一做上293之类的小细胞染色就让人抓狂 ，一洗就脱一洗就脱，所有的耐心都忍受不了它不负责任的脱落，让人抓狂，快来试试以下的几个小妙招吧，一个不行就多试几个 ，总有一个适合您现在的细胞。
一、预处理器皿（让表面先“粘人”）
1. 商用包被液5 min 迅速包被
使用我们的包被液（启达生物，货号：SD0044）直接铺满板底，37 ℃孵 5 min 即可吸出、晾干，随后无菌 PBS 润洗 1 次就能接细胞；哪怕易脱落的 293、P19Cl6 也能贴得牢牢的 。
使用包被液后（启达生物 ：SD0044）：
2 、“血清打底”法
把 20% 血清培养基先加到孔里 37 ℃孵 30 min，让血清中的纤连蛋白/玻连蛋白先吸附到塑料表面，再吸出换成常规培养基接细胞，贴壁率可瞬间提升 20–30% 。
3、钙离子助攻
在接种液里额外加 2–4 mmol/L 无菌 CaCl₂，Ca²⁺能促进整合素与基质蛋白结合，尤其适用于无血清或低血清体系。
二、接种技巧（让细胞“愿意”留） 高密度“抢地盘”
接种密度提高 30–50%，细胞自己分泌胞外基质的量就足够形成黏附网络，特别适合原代或状态一般的细胞;
三、先少后多“两步法”
T25 瓶先只加 3 mL 培养基，让细胞 8–12 h 内快速贴壁；然后再补到 5 mL，可显著减少漂浮死细胞；
四、37 ℃+预充气
把培养基提前 37 ℃预热，并用 5% CO₂/95% 空气轻轻冲 1 min，让 pH 落到 7.2 左右再接种，细胞 30 min 内就能伸展贴壁；
五、延长首次换液时间
贴壁弱的细胞接后 24 h 内不扰动，48 h 再首换，可让胞外基质沉积更充分，脱落率下降一半；
六、湿度防气泡
培养箱水盘始终保持 2/3 水位，湿度 >90%；气泡区细胞会因“断粮”而漂起，湿度够高即可避免；
七、静电小动作
冬天塑料板易带静电，拆包装前用湿巾擦一下外壁或把板在超净台里“晾”2 min，可消除静电对贴壁的干扰；
八、写在最后
发现细胞还是成片脱落？别急着扔，先把培养基吸出，加 1 mL 血清的轻轻吹下漂浮细胞，重新按上面“高密度+包被液法 ”二步法再铺一次，经常能“救”回 60% 以上。
细胞不贴壁，这样处理，90% 的“贴不牢”问题都能解决；祝你的细胞乖乖贴壁、不再当“小漂漂”