Bio-Rad发布生物制品残留宿主蛋白（HCP）检测验证方案
针对生物制品（重组疫苗、治疗性抗体、重组蛋白）中宿主细胞残留蛋白（HCP）检测方法的可靠性验证，伯乐生命（Bio-Rad Laboratories）发布了基于2D及Western Blot技术的宿主蛋白残留检测方法验证方案，用以评估HCP定量试剂盒中多克隆抗体的特异性。生物制品中的宿主细胞残留蛋白会导致过敏反应或潜在毒性等不良临床反应风险。因此必须建立合适的HCP检测验证方法来严格控制生物制品的质量。
ELISA是目前应用最广泛的HCP检测方法。该技术相对简单、精度良好，方便设定控制范围和建立技术规范。«中华人民共和国药典»2010年版三部中的HCP检测均是要求采用酶联免疫法测定。在该检测方法中， 用存在于生物制品中的HCP作为免疫原生产出的抗体质量至关重要。目前生物制品行业多以商业化的通用型HCP ELISA试剂盒来检测产品中的宿主蛋白残留（如Cygnus Technologies）。但宿主细胞的分泌型蛋白和部分死亡细胞释放的结构蛋白成分复杂，不同的工艺，加上相关基因产物需要经过独特的翻译后修饰，这些都大大增加了HCP的数量和生化复杂性。因此，通用型HCP ELISA试剂盒中的多克隆抗体对宿主蛋白的特异性问题很难进行评估。若商品化ELISA试剂盒中的多克隆抗体特异性和适用性不够高，则会带来漏检HCP的风险，从而对生物制品质量安全带来风险。
Bio-Rad Laboratories公司发布的HCP残留检测验证流程使用优化的2D分离条件与转印方法可有效分离检测CHO、酵母、大肠杆菌等细胞系的全蛋白谱。将2D Gel上的全蛋白转移至膜上，经ELISA试剂盒（商品化通用型或自制工艺特异型）内多克隆抗体孵育后进行Western Blot化学发光检测，以确认ELISA试剂盒中的多克隆抗体能够与哪些宿主细胞蛋白结合。通过Western Blot检测结果（多抗能检测到的HCP数量）与2D膜上检测结果（总HCP数量）的比较，即得出用于评价ELISA试剂盒特异性及适用性的Match Rate。
来自于Bio-Rad Laboratories的科学家使用此流程成功验证了某一ELISA试剂盒对于不同CHO细胞系HCP检测的适用性差异。从以下两个结果来看，即使是相同的ELISA试剂盒，其多克隆抗体对不同CHO细胞系的总蛋白覆盖率有很大差别（46%与20%）。显然，对于第二个CHO细胞系所表达的蛋白质产品，使用该ELISA试剂盒测定HCP残留会导致较大的数据偏差。
Bio-Rad Laboratories发布的HCP残留检测验证流程虽然以2D为基础，但是该流程使用同一张膜上的总蛋白数据与Western Blot数据进行统计分析，所以很好的避免了2D实验重复性对结果的影响，保证了数据的重复性与可靠性。在2013年WCBP论坛上FDA官员也明确了用于检测HCP残留的抗血清（多克隆抗体）一定要经过验证，而2D法被认为是最为合适的验证抗血清方法。
